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大型質(zhì)粒抽提試劑盒的操作方法
發(fā)布日期：
2017-11-23
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大型質(zhì)粒抽提試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)菌，再通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料。、專一吸附DNA。大型質(zhì)粒抽提試劑盒使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化、文庫(kù)篩選、體外翻譯、轉(zhuǎn)染一些常規(guī)的傳代細(xì)胞等。
1) 柱平衡步驟：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12,000rpm(～13400×g)離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
2) 將4.5ml過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管中，使用常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)，12,000rpm(～13400×g)離心1min，盡量吸取上清（菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。
3) 向留有菌液的離心管中加入250μl溶液P1（請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細(xì)菌沉淀。注意：如果有未*混勻的菌塊，會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
4) 向離心管中加入250μl溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意：溫和地混合，不要?jiǎng)×艺鹗?，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時(shí)間不應(yīng)超過5min，以免質(zhì)粒受到破壞，如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不*，應(yīng)減少菌體量。
5) 向離心管加入350μl溶液P3（，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時(shí)將出現(xiàn)白色絮狀沉淀12000rpm(～13400×g)離心10min，此時(shí)在離心管底部形成沉淀。注意：P3加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
6）將上一步收集的上清液用移液器轉(zhuǎn)移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀，12000rpm(～13400×g)離心30-60s。倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3放入收集管中。
7）可選步驟：向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm(～13400×g)離心30-60s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3重新放回收集管中。
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